Фагоцитоз ядерных эритроцитов перитонеальными макрофагами морской свинки.
Материальное оснащение: стеклянные флаконы на 50мл с бусами; шприц на 1 мл; центрифуга; центрифужные пробирки (4); обезжиренные предметные стекла; предметные стекла с лункой; покровные стекла; вазелин (15 г); 5%-ная взвесь гусиных эритроцитов (5 мл); краска Майя—Грюнвальда; дистиллированная вода (150 мл); подопытные животные: гусь, морская свинка, лягушка.

Постановка опыта.
Морской свинке за 24—48 ч до наблюдений в брюшную полость вводят 3%-ный раствор пептона или мясопептонного бульона в объеме 10 мл. Во время опыта в
брюшную полость вводят 1 мл 5%-ной взвеси гусиных эритроцитов.
Для приготовления 5%-ной взвеси эритроцитов гуся в сосуд со стеклянными бусами из подкрыльцовой вены берут 15—20 мл крови. Постоянным встряхиванием сосуда в течение 5 мин кровь дефибринируют и затем фильтруют через двойной слой марли.
Дефибринированную кровь центрифугируют при 1500 мин-1 в течение 10 мин. Сыворотку крови сливают, а в пробирку до такого же уровня наливают изотонический раствор натрия хлорида и вновь центрифугируют. Раствор над осадком сливают, 5 мл осадка эритроцитов переносят в мерную посуду и доливают до 100 мл изотонический раствор натрия хлорида.
Через 15, 30, 45 мин после введения эритроцитов из брюшной полости свинки получают перитонеальную жидкость. Для этого животное фиксируют в спинном положении, выстригают шерсть по средней линии живота краниальнее лонного сращения на 3—5 см. Затем животное переворачивают головой вниз, удерживая за задние лапки. Сзади от пупка надрезают кожу и, проколов брюшную стенку стерильной пастеровской пипеткой, набирают 1 — 1,5 мл перитонеальной жидкости.
Для изучения фагоцитоза готовят мазок на предметном стекле и висячую каплю на покровном стекле, которое вазелином приклеивают к предметному стеклу с лункой таким образом, чтобы капля висела над лункой.Для приготовления мазка каплю перитонеальной жидкости наносят на предметное стекло примерно на расстоянии 1 см от узкого края. Перед каплей ставят стекло с шлифованным ребром и соединяют его с каплей. Двигая шлифованное стекло к противоположному узкому краю предметного стекла, делают длинный и широкий мазок. Высохший мазок заливают краской Майя—Грюнвальда на 5 мин, добавляют равное количество дистиллированной воды и выдерживают еще 3—5 мин. После этого краску сливают, а мазок высушивают полоской фильтровальной бумаги. Препарат рассматривают под иммерсионной системой. В поле зрения обнаруживают крупные клетки — макрофаги, в цитоплазме некоторых из них четко выделяются гусиные эритроциты. Последние хорошо различимы по наличию ядер. Подсчитывают 100 макрофагов и среди них число клеток, содержащих гусиные эритроциты. Так определяют фагоцитарную активность — процент фагоцитов из 100 макрофагов. Затем находят фагоцитарное число — частное от деления числа эритроцитов, найденных в 100 макрофагах, на 100.
Для приготовления висячей капли на стекле с лункой делают ободок из вазелина в непосредственной близости от краев лунки.
На покровное стекло в центре помещают каплю 1%-ного раствора нейтральрота, приготовленного на изотоническом растворе натрия хлорида. К капле раствора-индикатора прибавляют каплю
перитонеальной жидкости и осторожно перемешивают запаянным концом пастеровской пипетки. Предметное стекло приклеивают
к покровному так, чтобы капля оказалась под серединой лунки, но не касалась дна лунки. Затем препарат быстро поворачивают покровным стеклом вверх. Под малым увеличением микроскопа
с прикрытой диафрагмой или опущенным конденсатором отыскивают край капли и на фоне желто-зеленых эритроцитов овальной формы находят красный комочек. Последний переводят в центр поля зрения и устанавливают большое увеличение (объектив 40). Красный комочек — это макрофаг, внутри которого видны ярко-красные эритроциты. В зависимости от стадии фагоцитоза макрофаг на своей поверхности может фиксировать до 10 эритроцитов и более. Внутри макрофага находятся эритроциты на разных стадиях разрушения, которые в процессе ферментолиза в присутствии индикатора нейтрального красного окрашиваются в розовый, а позже в рубиново-красный цвет, что указывает на изменение реакции в кислую сторону. Свободные эритроциты и нефагоцитировавшие макрофаги окраски не меняют.
В висячей капле можно изучать также и стадии фагоцитоза, но они менее отчетливы, чем в мазке.
Оформление протокола опыта .
Зарисовывают и описывают стадии фагоцитоза по И. И. Мечникову; указывают значение найденных показателей фагоцитоза: фагоцитарную активность и фагоцитарное число.
Делают выводы. В заключение объясняют механизм фагоцитоза и его значение для организма.

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.

Сообщить об опечатке

Текст, который будет отправлен нашим редакторам: