Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.

Метод приготовления давленных ацетокарминовых препаратов (корешки растений) — Микроскопическая техника в биологии и медицине

Метод приготовления давленных ацетокарминовых препаратов (корешки растений)


1. Прорастить семена растений в чашках Петри при температуре 22-24°С (разные семена требуют разного времени проращивания, обычно от 36-72 часов).
2. Поместить проростки в раствор колхицина или другого агента(винбластин, винкристин, циклофосфан, можно использовать аптечные препараты), блокирующего митотический аппарат клетки. (Концентрация колхицина для разных семян варьирует от 0,01% до 0,1%, время — от 2 до 4 час).
3. Отмыть корешки от колхицина в дистиллированной воде.
4. Поместить корешки в фиксатор (уксуснокислый спирт 3:1) на 4-24 часа. (При длительном хранении материала корешки переносят в 75% спирт и оставляют в холодильнике).
5. Поместить корешки в раствор красителя (ацетокармин).
6. Пузырек с краской перенести в кипящую воду на 6-12 минут.
7. Остудить пузырек с краской до комнатной температуры.
8. Перенести окрашенные корешки на часовое стекло в 45% уксусную кислоту.
9. Отрезать темноокрашенный кончик корешка и перенести его в каплю 45% уксусной кислоты на предметное стекло.
10. Закрыть материал покровным стеклом.
11. Положив на покровное стекло фильтровальную бумагу, пинцетом или деревянным концом препаровальной иглы распределить материал под стеклом в монослой,
12. Для сохранения препарата все стороны покровного стекла заливают при помощи скальпеля парафином.
13. Приготовленный временный препарат сначала анализируют под малым увеличением микроскопа, выбирая хорошие метафазные пластинки.
14. Метафазная пластинка считается пригодной для исследования, если все хромосомы лежат в одной плоскости и не имеют сильных наложении. Клетка, в которой находятся хромосомы должна иметь целую оболочку. Перевести микроскоп на большое увеличение.
15. Сфотографировать или зарисовать хромосомы метафазной пластинки.

МЕТОДИКА ИССДОВАНИЙ МЕЙОЗА У РАСТЕНИЙ

1. Во время цветения зафиксировать бутончики нераскрывшихся цветков (размер бутонов, пригодных для исследования мейоза колеблется от 2 до 5 мм).
2. Фиксация должна продолжаться не менее 4-х часов.
3. При длительном хранении материала (более 2-х недель) бутоны переносят в 70% спирт и хранят в холодильнике.
4. Перед окрашиванием бутоны освобождают от чашелистиков и помещают в пузырек с ацетокармином.
5. Пузырек с краской поставить в водяную баню и кипятить 6-10 минут.
6. Охладить пузырек с краской до комнатной температуры.
7. Перенести окрашенные бутоны на часовое стекло в 45% уксусную кислоту.
8. В капле 45% уксусной кислоты на предметном стекле отпрепарировать из бутона пыльники.
9. Пыльники закрыть покровным стеклом.
10. Легким нажимом выдавить на покровное стекло содержимое пыльника.
11. Положив на препарат фильтровальную бумагу, удалить избыток уксусной кислоты.
12. Обвести с помощью скальпеля покровное стекло расплавленным парафином.
13. Препарат анализируется сначала под малым увеличением микроскопа.

 

ПРИГОТОВЛЕНИЕ КРАСИТЕЛЕЙ ДЛЯ ДАВЛЕНЫХ ПРЕПАРАТОВ
Приготовление ацетокармина, ацетоорсеина и ацетолакмоида
Приготовление ацетокармина.

1 г кармина растворяют в 100 мл 45%- ной уксусной кислоты (45 мл ледяной уксусной кислоты и 55 мл дистиллированной воды) в течение трех часов. Растворение ведут в колбе на водяной бане с обратным холодильником или на медленном огне, стараясь не кипятить, а всякий раз перед закипанием снимать колбу с раствором с огня. Остывший раствор фильтруют и помещают в посуду с притертой крышкой.

 

Приготовление ацетоорсеина.
1 г орсеина растворяют в 45 мл горячей уксусной кислоты и добавляют после остывания 55 мл дистиллированной воды. После взбалтывания и фильтрации раствор готов к употреблению.

Приготовление ацетолакмоида.
100 мл 60%-ной уксусной кислоты (60 мл уксусной ледяной кислоты и 40 мл дистиллированной воды) доводят до кипения, всыпают 1 г лакмоида, кипятят несколько минут и в горячем виде фильтруют.

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.

Сообщить об опечатке

Текст, который будет отправлен нашим редакторам: