Получение лейкоконцентрата
Метод Поспеловой
Принцип.
Фракционирование составных частей крови за счет различия их удельного веса и ускорения оседания эритроцитов трилоном В.
Посуда и аппаратура.

  1. Центрифужные цилиндрические пробирки емкостью 10 мл с резиновыми пробками.
  2. Пипетки измерительные.
  3. Пипетки тонкие пастеровские.
  4. Термостат.
  5. Центрифуга 1500 об/мин.
  6. Штатив для мазков.
  7. Штатив для установки пробирок под углом 45°.
  8. Шприц.
  9. Предметные стекла.

 

Реактив.
3% раствор трилона В.

Методика.
В мерную центрифужную пробирку от­меривают 1 мл 3% раствора трилона В и 4 мл крови, взятой из вены самотеком. Осторожно смешивают и ставят в термостат под углом 45° при температуре 37° на 15—20 мин. Как только отделится 2—3 мл плазмы, верхний слой ее осторожно отсасывают пастеровской пипеткой и выливают. Нижний слой плазмы и лейкоцитарную пленку отбирают в центрифужную пробирку.
Центрифугируют в течение 10 мин при 1500 об/мин. Из осадка готовят мазки, красят, как обычные мазки периферической крови.
При лейкопении берут двойной объем крови и трилонаВ.
Кровь можно брать не натощак.
Состав лейкоконцентрата венозной крови здоровых людей приведен в табл.4.

Состав лейкоконцентрата венозной крови здоровых людей приведен в табл.4.
Нейтрофилы Эозинофилы Базофилы Лимфоциты Моноциты Плазмати-ческие клетки
палочко-ядерные сегменто-ядерные
% 1,2 ± 0,1 58,8 ±0,7 1,8±0,05 0,7±0,08 31,2± 1,0 7,1± 0,3 0,2±0,01
Абслютные числа 66,8 ±5,3 3285,6 ±79,7 82,0±7,3 29,6±1,4 1829,0±65,2 396,5±20,5 11,8±2,9

Микрометод лейкоконцентрации (метод Емешиной)
Принцип.
В отличие от всех других методов лейкоконцентрации здесь ограничиваются весьма неболь­шим количеством крови, взятым из пальца, а не из вены больного.
Посуда и аппаратура.

  1. Мерные центрифужные пробирки.
  2. Штатив для пробирок.
  3. Пипетки Пастера.
  4. Микроцентрифуга .
  5. Штатив для мазков.
  6. Предметные стекла.
  7. Копье для прокола кожи.

Реактивы.
Разводящий раствор:
3 г нейтрального цитрата натрия,
3 г сахарозы,
100 мл 2,5% раствора желатины,
0,2 г альбуцида.

Методика.
В мерную центрифужную пробирку отмеривают 0,25 мл разво­дящего раствора и, проколов кожу пальца больного, набирают в ту же пробирку 0,5 мл крови. Для предупреждения образования сгустка стекающую по стенке пробирки кровь перемешивают с разводящим раствором. Затем пробирку с разве­денной кровью ставят в штатив на 30—35 мин при комнатной температуре до образования в ней двух четко разграниченных слоев. Надосадочную жидкость со взвешенными в ней лейкоцитами, тромбоцитами и небольшой примесью эритро­цитов осторожно отсасывают пастеровской пипеткой и переносят в пробирку микроцентрифуги. Центрифугируют 3—4 мин со скоростью 7—8 оборотов ручки в минуту, что соответствует 700—800 об/мин центрифуги. Центрифугиро­вание с большим числом оборотов вызывает частичное разрушение лейкоцитов. По окончании центрифугирования надосадочную жидкость из пробирки отсасы­вают, а из осадка с минимальным количеством надосадочной жидкости делают мазки, которые фиксируют и окрашивают по Паппенгейму—Крюкову или по Рома­новскому.

Описанным методом пользуются и при гистохимическом изучении форменных элементов белой крови на содержание в них РНК и ДНК, а также для подсчета жизнеспособных миелокариоцитов в костном мозге у больных аплазией.
Метод лейкоконцентрации из малых количеств крови прост и может приме­няться в любой лаборатории.

Клиническое значение.
Лейкоконцентрация применяется при больших лейкопениях, алейкемических формах лейкоза, для выявления опухолевых клеток, внутриклеточных паразитов, LE-клеток и др.

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.

Сообщить об опечатке

Текст, который будет отправлен нашим редакторам:

Яндекс.Метрика