Приготовление препаратов для микроскопии в домашних условиях
Происхождение микропрепаратов берет начало в использовании слоновой кости или обычной кости в качестве подставки под образцы, которые помещались между дисками прозрачной слюды. Подобная конструкция была популярной в викторианской Англии, пока Королевское Микроскопическое Общество не представило стандартизированное предметное стекло для микроскопа.

Термины и определения
Г
истологический препарат: Тонкий срез биологического объекта, доступный для изучения в проходящем свете микроскопа, окрашенный контрастными красителями для выявления его структур и помещенный на предметное стекло.

Микропрепарата гистологический
Предметное стекло, на котором расположен окрашенный в большинстве случаев, срез ткани, для микроскопического исследования.

Способы приготовления микропрепаратов по биологии
Микропрепарат, представляет собой тонкий срез органа живого организма или объекта не живой природы, заключенный в прозрачную среду, чей индекс преломления равен индексу преломления стекла, или близок к этому (показатель преломления предметного стекла n=1,515).  Объект исследования, обычно помещается между предметным и покровным стеклами, пространство между которыми заполняется  средами с индексом преломления близким  к стеклу.

Наиболее частой средой, используемой в отечественной практике для заключения и хранения окрашенных гистологических препаратов, являются канадский или пихтовый бальзамы, представляющие собой растворы натуральных смол в ксилоле. А так же полистирол растворенный в ксилоле с добавлением, пластификатора, который после высыхания образует прозрачную пленку.
Микропрепараты позволяют демонстрировать внутреннее клеточное строение организмов, что помогает формировать знания о едином клеточном строении организмов.

Микропрепараты можно разделить на две группы: постоянные, изготовленные по смециальной методике, которая позволяет сохранить объект очень продолжительное время, без каких либо видимых изменений в структуре объекта; временные, приготовленные непосредственно перед наблюдением под микроскопом с целью однократного пользования.
Постоянные микропрепараты представляют собой тончайшие срезы тканей организмов, их органов. Клетки в большинстве своем не имеют окраски и потому, даже при большом увеличении микроскопа, бывает трудно рассмотреть внутриклеточные структуры, в том числе ядро. В связи с этим микропрепараты тканей окрашивают специальными красителями для придания им большей наглядности.
Временные препараты так называются потому, что не сохраняются долго. После ознакомления с микрообъектом временный препарат смывается с предметного стекла.
Для изучения живых клеток микроорганизмов применяют препараты “раздавленная капля”, “висячая капля”, “отпечаток”, “агаровая пленка” (“микрокультура”). Препараты живых клеток рассматривают с “сухими системами ” микроскопа. Препараты, работа с которыми уже закончена, прежде чем вымыть, выдерживают в дезинфицирующем растворе, если эти ткани принадлежали животным[4]. Микропрепараты позволяют проводить широкий ряд опытов по биологии
Требования к микропрепаратам:
Стекла должны быть бесцветными и прозрачными. Покровное стекло должно быть толщиной равной 0,17мм, предметное стекло толщиной в 1,0-1,2 мм которое служит основой изделия. Микроскопические срезы должны быть как можно тоньше, к сожалению, без специального прибора-микротома, изготовить достаточно тонкий срез исследуемого объекта весьма трудно, а иногда и невозможно.
В некоторых случаях приготовление препаратов несложно, в других — требует специальной техники.
Микропрепараты должны отвечать определенным требованиям, которые необходимо тщательно соблюдать.
Для приготовления постоянных микропрепаратов необходимо специальное оборудование.

Оборудование, необходимое для приготовления микропрепаратов
Рабочий стол.
При отсутствии специального стола с успехом может быть приспособлен любой стол (желательно с ящиками) с площадью рабочей поверхности не менее 60*120см. Если крышка стола не имеет специального покрытия, то его следует сделать из какого-либо влагоустойчивого материала. Однако участок стола, предназначенный для непосредственной работы по приготовлению препаратов, в любом случае необходимо накрыть стеклом и расположить под ним небольшие (9*12см) листы белой или черной бумаги. Этим создается соответствующий фон, облегчающий работу с окрашенными (белый лист) и не окрашенными (черный лист) объектами. Рекомендуется также на оба листа нанести контуры предметного стекла с обозначением места расположения и размеров покровного стекла. Для того, что бы удобнее расположить необходимое оборудование, следует иметь двухъярусную полку для реактивов, растворов и посуды, которая устанавливается либо перед работающим (вдоль заднего края стола), либо сбоку в зависимости от расположения стола относительно источника света.

Лабораторная посуда.
Широкогорлые банки с притертыми пробками различной вместимости от 50 до 200 мл – используют для составления гистологических батарей, предназначенных для подготовки кусочков тканей к заливке различными средами. Более крупные банки применяют для фиксации и хранения кусочков тканей в фиксирующих жидкостях, обработки предметных стекол, приготовление нейтрального формалина и пр. В место банок с притертыми пробками можно использовать небольшие хозяйственные банки с жестяными завинчивающимися крышками, разного объема. Бюксы — небольшие круглые стеклянные стаканчики различного диаметра и высоты с шлифованными крышками.
Биологические стаканчики — круглые, овальные или четырехугольные (как и высокие бюксы) применяют для проводки гистологических срезов, монтированных на предметных стеклах. Для придания устойчивости и обеспечения порядка в расстановке их помещают в специальные стойки, изготовленные из дерева или пластмассы, по несколько штук в ряд в зависимости от методики обработки.
Чашки Петри — широкие, плоские стеклянные чашки с крышками – пригодны для различных манипуляций (окраска свободно плавающих и наклеенных на предметные стекла срезов, использование в качестве подставок под бюксы и т.д.).
Мерная посуда – цилиндры и мензурки различной емкости (от 10 до 250-500 мл) воронки различных размеров.
Химические стаканчики — круглые стеклянные стаканчики без крышек вместимостью 50-100 мл – находят широкое применение при проведении, окраски срезов наклеенных на стекла и т.д. Колбы (плоскодонные) – вместимостью от 50 мл до 2 л. Малые колбы применяют для приготовления и хранения растворов различных красителей, большие — под дистиллированную воду и прочие жидкости, расходуемые в больших количествах.
Пипетки обычные (предназначенные для закапывания лекарств) используют для накапывания на срезы красителей и различных жидкостей, градуированные (вместимостью 0,1-100 мл) применяют для отмеривания малых количеств различных жидкостей. Можно использовать в настоящее время широко используемые автоматические пипетки различной вместительности.
Предметные стекла – прямоугольные пластины размером 76*25 мм толщиной 1,0-1,2 мм, предназначенные для размещения срезов в процессе приготовления микропрепаратов. Более толстые стекла не позволяют получить резкое изображение краев диафрагмы осветителя в плоскости препарата, так как оно оказывается в толще стекла, а это нарушает фокусировку конденсора и резко снижает четкость изображения.

Предметное стекло с полосой для записи и шлифованными краями.

Покровные стекла – представляют собой тонкие (0,15-0,17 мм толщины, более толстые стекла ухудшают качество изображения) пластинки различных размеров. Служат для покрытия обработанных срезов, расположенных на предметных стеклах. Размеры покровных стекол выбирают в зависимости от площади объекта.

Покровное стекло

Инструменты.
Инструменты, используемые в гистологической лаборатории, включают в себя пинцеты, скальпели, кровоостанавливающие зажимы, корнцанг, бактериологические петли шпатели, препаровальные иглы – прямые и изогнутые, металлические и стеклянные. Стеклянные иглы необходимы при импрегнации серебром, когда металлические иглами пользоваться нельзя. Так же необходимо иметь спиртовку, фильтровальную бумагу, иголки, нитки, плотную бумагу для этикетирования материала, лейкопластырь и карандаш по стеклу.

Подготовка предметных стекол.
Предметные стекла, применяемые для получения гистологических препаратов, необходимо предварительно подготовить. Исключение составляют готовые к использованию и специально упакованные импортные предметные стекла. Предметные стекла моют в теплой воде с любым средством для мыться посуды (FAIRY),затем ополаскивают горячей водой и промывают в течение нескольких часов в проточной воде. Другой вариант мытья: разместить стекла в штативе, для окраски,или так что бы они не сопрекасались и обработать их  средством для удаления жира например: «Средство для удаления жиров Unicum Gold спрей», затем ополаскивают горячей водой и промывают в течение нескольких часов в проточной воде Вымытые стекла протирают чистой хлопчатобумажной тканью и на несколько дней помещают в 96 % спирт. Обезжиренные стекла извлекают пинцетом из этой смеси, протирают чистой тканью и складывают в коробочку.  Качество обезжиривания можно проверить, капнув на предметное стекло воду из пипетки: по обезжиренному стеклу вода растекается тонким слоем, а не собирается в каплю. Для лучшей фиксации срезов на стекле разработан способ фиксации среза к предметному стеклу: ванночку с теплой дистиллированной водой капают несколько капель жидкого казеинового клея и перемешивают. В полученную мутноватую жидкость опускают срезы, расправляют препаровальной иглой и вылавливают на чистое обезжиренное стекло. Этот способ дает неизменно хороший эффект и вокруг среза отсутствует окрашенный фон, как это часто бывает при применении белка [11]. Таким образом, для приготовления микропрепаратов требуется специальное оборудование и инструменты. Основными из них являются предметное и покровное стекла.

Способы приготовления временных микропрепаратов.

  1. Возьмите предметное стекло и, держа его за боковые грани, положите на стол.
  2. Положите в центр стекла объект исследования (тонкие волокна ваты).
  3. В пипетку наберите немного воды из стаканчика и нанесите на препарат 1-2 капли.
  4. Возьмите за боковые грани покровное стекло и положите его сверху на предметное стекло (рис.).
  5. Если жидкости много, и она вытекает из-под покровного стекла, удалить ее при помощи фильтровальной бумаги. Если же под покровным стеклом остались места, заполненные воздухом, то добавить жидкость, поместив ее каплю рядом с краем покровного стекла, а с противоположной стороны фильтровальную бумагу
  6. Препарат готов.
  7. Разместите его на предметном столике микроскопа и рассмотрите его в начале при малом увеличение , а затем при большим.

Этапы приготовления микропрепарата. Накрывание объекта покровным стеклом.

Микропрепарат: Устьиц клеток растения.
Приготавливают несколько срезов нижней эпидермы листа и помещают их на 2 часа в 5 %-ный раствор глицерина. Срезы помещают на предметное стекло в том же растворе. Рассматривают препарат.
Затем заменяют глицерин на воду, оттягивая его из-под стекла фильтровальной бумагой. Смотрят, что изменилось.
После этого воду заменяют 20%-ным раствором глицерина или 1М раствором сахарозы. Наблюдают изменения.
Молярная концентрация с – отношение количества вещества (в молях), содержащегося в растворе, к объему раствора. Единицы измерения — моль/м3, (моль /л). Раствор, имеющий концентрацию 1 моль/л, обозначают 1 М; 0,5 моль/л, обозначают 0,5 М.
Приготовление 1 М раствора САХАРОЗЫ.
Молярная концентрация с – отношение количества вещества (в молях), содержащегося в растворе, к объему раствора. Единицы измерения — моль/м3, (моль /л). Раствор, имеющий концентрацию 1 моль/л, обозначают 1 М; 0,5 моль/л, обозначают 0,5 М.
Молярная концентрация C(B) показывает, сколько моль растворённого вещества содержится в 1 литре раствора.
C(B) = n(B) / V = m(B) / (M(B) · V),где М(B)  — молярная масса растворенного вещества г/моль. Молярная концентрация измеряется в моль/л и обозначается «M». Например, 2 M NaOH — двухмолярный раствор гидроксида натрия. Один литр такого раствора содержит 2 моль вещества или 80 г (M(NaOH) = 40 г/моль).
Пример: Какую массу САХАРОЗЫ C12H22O11 нужно взять для приготовления 0,1 литра 1,0 М раствора?
Решение: M(C12H22O11) = C(C12H22O11) · V · M(C12H22O11) = 1 моль/л · 0,1 л · 342,29 г/моль » 34,229 г. Таким образом, для приготовления 0,1 литра 1 М раствора нужно взять 34,229 г и растворить в воде, а объём довести до 0,1 литра( довести до 100 мл). Концентрацию раствора можно выразить количеством молей растворённого вещества в 1000 г растворителя. Такое выражение концентрации называют моляльностью раствора.

Микропрепарат: Клетки слизистой оболочки полости рта

Для работы нужны: микроскоп, предметное и покровное стекла, препаровальная игла, скальпель, пипетка, 0,9-процентный раствор NaCl (физиологический раствор), подкрашенный метиленовой синью или чернилами, спирт, вата.
Порядок работы:

  1. Тщательно протрите ватой предметное и покровное стекла.
  2. При помощи пипетки нанесите на предметное стекло капельку подкрашенного физиологического раствора.
  3. Протерев ручку скальпеля спиртом, проведите ею (не лезвием!) несколько раз по внутренней поверхности щеки или нижней губы. Вы снимете немного слизи вместе со слущившимися клетками слизистой оболочки полости рта.
  4. Перенесите эту слизь в каплю на предметном стекле при помощи препаровальной иглы, осторожно смешайте слизь с подкрашенным раствором и накройте препарат покровным стеклом.
  5. Поместите препарат под микроскоп и рассмотрите его. Найдите слегка окрасившиеся клетки. Рассмотрите в них бледно окрашенную цитоплазму и более темное ядро.
  6. Зарисуйте рассмотренные вами клетки в тетради и сделайте надписи.

Методика приготовления постоянных микропрепаратов
Обязательным условием для долгосрочного хранения препарата из растительного или животного материала является его фиксация. Фиксирующих жидкостей много, самые доступные из них: этиловый спирт и продающийся в аптеках препарат на основе формалина (Формидрон). Состав: 100 мл препарата содержат 10 г раствора формальдегида в пересчете на 37 % формальдегид; вспомогательные вещества: спирт этиловый 96 %, одеколон, вода очищенная.

Препарат ФОРМИДРОН, может быть использован для создания архива биологических объектов, вспомогательные вещества входящие в аптечный препарат, не сколько не мешают  сохранности объекта.
ВНИМАНИЕ ФОРМАЛЬДЕГИД ОБЛАДАЕТ РАЗДРАЖАЮЩИМ ДЕЙСТВИЕМ.
Если на дне банки с 40 % формалином образовался осадок белого цвета (параформальдегид), то его можно растворить, подогрев до 70-80 °С (в вытяжном шкафу! или на открытом воздухе), и использовать для фиксации.

Рассмотрим состав и применение наиболее широко распространенных фиксаторов
Спирт-формол по Шафферу — 10% формалин, который готовят из 1 части 40% формалина и 2-3 частей 96 % спирта. Продолжительность фиксации 24-48 ч. Дальнейшая промывка в воде не требуется, и материал сразу же помещают в 96 % спирт. Выпадение белого осадка никак не сказываеться на свойстве фиксатора.

Спирт с формалином. Применяется широко при гистологическом изучении позвоночных животных. Может быть использован и при работах с беспозвоночными. Изготовляется следующим образом: 70° спирт — 100 см3, формалин 40%-ный — 2—3 см3. Продолжительность фиксации 12—24 ч, после чего объекты переводятся в 70° спирт, где и хранятся впредь до дальнейшей обработки. Дает удовлетворительные результаты. Этот фиксатор удобен главным образом в силу своей доступности, так как спирт и формалин имеются в каждой лаборатории.

ПРАВИЛА РАБОТЫ С ФИКСАТОРАМИ
Практически все фиксаторы относятся к токсичным веществам поэтому необходимо соблюдать правила техники безопасности при работе с реактивами.

Фиксация необходима с целью остановки (прекращения) жизнедеятельности клеток. Для этого объект помещают в соответствующий фиксатор на время от нескольких минут до нескольких часов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ ПРЕПАРАТА ПОД ПОКРОВНОЕ СТЕКЛО
Большинство используемых в цитологии и гистологии красителей представляет собой водные растворы. Чтобы сделать временный препарат, срез, вынув из водного раствора красителя, промывают и заключают в глицерин. Приготовить постоянный препарат несколько сложнее: необходимо покрыть срезы покровным стеклом, заключив их в прозрачную затвердевающую среду. Можно, ополоснув срезы дистиллированной водой, капнуть на них разогретый раствор желатины. Но большую сохранность и лучшее качество препаратов можно получить, заключив их в канадский бальзам (прозрачную смолу пихты с показателем преломления n= 1,535). Поскольку канадский бальзам не смешивается с водой, но растворим в ксилоле (толуоле, бензоле), создается необходимость провести препарат по «проводке» для срезов, но в направлении, противоположном тому, в которое стекла велись для удаления парафина и подготовке к окраске. При этом нужно помнить, что даже незначительное присутствие воды в срезе сделает препарат мутным, непригодным для изучения. Поэтому переносить срезы по проводке от воды к толуолу надо медленно, погружая стекло в стаканчик со спиртом или толуолом на 2—3 мин. Схема проведения срезов может быть следующей:
дистиллированная вода — ополоснуть,
спирт 70%-ный — 2 мин,
96%-ный — 2 мин,
100%-ный —3 мин,
Ксилол I — 2 мин,
Ксилол II — 3—5 мин.
Надо иметь в виду, что некоторые красители легко вымываются из препаратов как в воде, так и в спиртах. Поэтому в некоторых случаях приходится избегать промывки препаратов и проведения через спирты низких концентраций. Чтобы достигнуть обезвоживания, приходится препараты осторожно промокать фильтровальной бумагой, опуская их сразу в 96%- или 100%-ный спирт, можно заменять этиловые спирты ацетоном или изоамиловым спиртом.

Итак, задача, которая стоит при подготовке препарата для монтирования его под покровное стекло, состоит в том, чтобы, не вымыв красителя, добиться полного обезвоживания среза. Достигается это проводкой по спиртам возрастающей крепости, вплоть до 100%. Обработка срезов ксилолом имеет двоякое значение: с одной стороны, в нем достигается просветление препарата, усиливается его прозрачность (краситель при этом из препарата не вымывается), с другой стороны, создаются благоприятные условия для дальнейшего пропитывания среза канадским бальзамом, который растворим в ксилоле. Само заключение среза под покровное стекло осуществляется быстро, пока на препарате не испарился ксилол. Капля бальзама наносится на покровное стекло (оно должно быть чистым и сухим), и покровное стекло быстро перевертывается над срезом. Можно капать бальзам на предметное стекло на поверхность среза и быстро покрывать его покровным стеклом. Канадский бальзам должен иметь консистенцию растительного масла (или гуще). Через 1—2 дня бальзам застывает.

Вместо канадского бальзама можно использовать синтетическую среду на основе полистирола.
Для этого берут 25г бесцветного полистирола, 5 мл дибутилфталата (пластификатор может быть любой) и доливают ксилолом до 100 мл. Раствор должен иметь консистенцию меда. Заключение среза под покровное стекло не отличается, от выше описанного.
Несомненным плюсом синтетического бальзама это инертность и более лучшая сохранность красителей.

Этапы приготовления постоянного микропрепарата
1 Изучаемый объект помещают  в раствор 1части ФОРМИДРОНА  с 2 частями воды на несколько дней.
Для мазков это время ограничивается 15 минутами и формидрон разводить не следует.
В случае использования этилового спирта время фиксации составляет 15-20 мин.
2 После фиксации  объект  следует отмыть от фиксатора, для этого его помещают на несколько часов в проточную воду. Для удержания объекта при отмывке удобно поместить его  в ситечко-шарик для заваривания чая. Исследуемый объект переносят в батарею спиртов с целью удаления воды.
Мазки ополаскивают в проточной воде в течение 3-5 минут. Струя воды должна быть не сильной, мазок сушат.
3 Далее если необходимо препарат может быть окрашен одним из доступных  вам красителей.
4 После окраски препарат готовят к заключению в монтирующую среду.
Приготовить батарею ( ряд флаконов ) растворов спиртов возрастающей крепости  для удаления воды.  Возможно использовать как этиловый спирт (антисептический раствор) так и Изопропиловый спирт (ИПС) который можно приобрести в магазинах специализирующихся на продаже радиодеталей.
Последовательно наливаем в лабораторные стаканчики этанол или изопропанол в концентрациях 50%, 70%, 96%, 99%.
Объект помещают в  стаканчик,  начиная с 50% этанолом на 10 минут. Затем перемещают объект в стаканчики с все более высокой концентрацией спирта, выдерживая в каждом по 10 минут. В процессе такого перемещения этанол будет плавно вытягивать воду из объекта. Помещать объекты сразу в концентрированный этанол нельзя, так как в этом случае, быстро выходящая из клеток вода может повредить клеточные оболочки.
Для мазков столь долгое пребывание в спиртах не требуется , достаточно 30-60 секунд, так как некоторые красители могут вымываться из мазка.
5 Если Вы хотите заключить препарат  в канадский бальзам, обезвоженный материал переносят в уайт-спирит или ксилол  на 5-6 часов,  Канадский бальзам можно заменить на раствор канифоли  в  уайт-спирите(ксилоле), по консистенции напоминающий сироп.
6 Если препарат заключается в глицерин-желатиновую смесь, то объект переносят не уайт-спирит, а в глицерин на несколько часов ( глицерин, аптечный)
Заключение объекта в глицерин-желатин.
Последний приготовляется следующим образом. Чистый желатин (7 г.) размачивают в течение 2—3 ч. в 42 см3 дистиллированной воды, добавляют 50 г. глицерина и 0,5 г. кристаллической карболовой кислоты. Все вместе нагревается при помешивании на водяной бане, фильтруется и охлаждается. При появлении осадка тщательно профильтровать через стекловату. Готовый «глицерин-желатин» хранить в герметичном сосуде. При комнатной температуре глицерин-желатин застывает.

Небольшой кусочек глицерин-желатина иглой или скальпелем переносят на предметное стекло. Последнее слегка нагревают на пламени спиртовки, глицерин-желатин расплавляется. В него из глицерина переносится объект и покрывается покровным стеклом.
Мазок заключают  следующим образом, кусочек глицерин-желатина помещают на покровное стекло Последнее слегка нагревают на спиртовке, глицерин-желатин расплавляется, объект покрывается покровным стеклом.
Пространство между предметным и покровным стеклом заполняется монтирующей средой, которая, закрепляет покровное и предметное стекла и консервирует объект. Самым главным требованием к монтирующей среде является соответствие ее коэффициента преломления света к аналогичному показателю стекла.
7 Заключение объекта в канифоль или канадский бальзам
На покровное стекло по центру наносят каплю или, если стекло длинное, две капли жидкого раствора канифоли. Покровное стекло помещают каплей вниз  и слегка прижимают.

Края покровного стекла не следует вытирать ватой или марлей, смоченной ксилолом, так как при этом часть смолы может растечься по чистой поверхности покровного стекла. Засыхая, она образует неровности, которые мешают наблюдению под микроскопом и от которых очень трудно избавиться.
В результате неполного обезвоживания в окрашенных заключенных препаратах часто образуются непрозрачные или мутные зоны. Под микроскопом в таком участке среза и над ним обнаруживаются многочисленные мелкие капельки воды, окраска сильно выцветает. Чтобы избавиться от этого, снимают покровное стекло, смывают ксилолом синтетическую смолу или бальзам, обезвоживают срез в 100%-ном спирте, ацетоне или изопропиловом спирте, просветляют в смеси ксилола с обезвоживающим агентом и в 2-3 сменах свежего ксилола и вновь заключают.
Синтетическая монтирующая среда на основе полистирола.
Полистирол (бесцветный)-25г.(можно использовать пищевые стаканчики)

Дибутилфталат-5мл (любой доступный пластификатор, если не добавлять, полистирол трескается после высыхания)
Ксилол до 100 мл.
Растворение происходит в течение нескольких дней, раствор должен иметь консистенцию меда.

 

Методика изготовления мазка-отпечатка.
Различают «сухие» и «влажные» мазки. Первые имеют ограниченное применение и используются почти исключительно при изучении крови и кровепаразитов. «Влажные» мазки применяются часто главным образом при изучении паразитических простейших, а также и в других случаях. Мазки изготовляются следующим образом. Пинцетом берут тот орган, из которого предполагается сделать мазок, и «намазывают» на покровное стекло. Мазок должен быть совершенно равномерным и одинаковой толщины на всем покровном стекле. Если этого достигнуть сразу не удалось, то при помощи препаровальной иглы можно частично исправить мазок.
Не давая подсохнуть мазку, покровное стекло опускают мазком вниз на теплый этиловый спирт, предварительно налитый в часовое стекло или солонку. Происходит быстрая коагуляция тканевых элементов, и мазок плотно пристает к стеклу. Дальнейшая обработка мазка та же, что и тотальных препаратов. После фиксатора следуют промывка в 70° спирте, вторичная промывка в спирте, перенос в воду, окраска, отмывка в воде; спирты возрастающей крепости, ксилол, бальзам (полистирол).

Методика изготовления мазка-отпечатка из печени рыбы:
1. рыбу декапитировать хирургическими ножницами;
2. вскрыть брюшную полость и поместить печень в чашку Петри;
3. печень рассечь лезвием и осторожно осушить поверхность разреза фильтровальной бумагой;
4. обезжиренное стекло слегка нагреть над пламенем спиртовки и коснуться поверхности разреза;
5. мазок высушить на воздухе и окрасить любым доступным красителем.

Мазки крови для исследования лейкоцитарной формулы готовят следующим образом.

Шаг 1.

Поместить небольшую каплю венозной крови на предметное стекло, с помощью стеклянной капиллярной пипетки,  (или непосредственно из места укола пальца перенесите выступившую каплю крови на конец стерильного предметного стекла. Избегайте при этом всякого контакта между проколотым участком кожи и стеклом.) Оставляют стекло в горизонтальном положении.

Шаг 2.

Размазывают каплю крови по стеклу с помощью чистого шлифованного стекла, помещая его под углом 45°; коротким ребром, подождав, пока вся кровь расплывется по нему

Шаг 3.

Как только кровь растеклась по ребру, быстрым движением от капли проводят по предметному стеклу. Не следует сильно нажимать на стекло, так как при этом травмируются форменные элементы крови.

Шаг 4.  После приготовления мазки быстро сушат на воздухе до исчезновения влажного блеска. Подсушить мазок можно, подержав его над абажуром лампы или помахав им в воздухе. Хорошо сделанный мазок тонок, имеет желтоватый цвет и оканчивается «метелочкой».

Густо-розовые и красноватые мазки непригодны для счета, так как они слишком толсты и клеточные элементы при этом дифференцировать невозможно.При медленном высыхании может изменяться морфология клеток.

Техника мазка — слева направо:
Мазок 1 — Идеальный мазок
Мазок 2 – В момент размазывания мазка произошла остановка.
Мазок 3 – Перекос мазка.
Мазок 4 — Капля крови слишком большая.
Мазок 5 — Мазок слишком короткий.

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.

Сообщить об опечатке

Текст, который будет отправлен нашим редакторам:

Яндекс.Метрика